酶溶菌作用

酶通常单独或与化学和物理手段结合使用来溶解细胞,或简单地使细胞通透,使物质进出完整的细胞囊(用于显微分析,如荧光原位杂交,FISH)。作为一种规则,酶是选择性的,下面将详细介绍这一点。

溶菌酶是目前最常用的酶,它通过水解真细菌细胞壁中肽聚糖中的0-1-4糖苷键来溶解细菌细胞壁。革兰氏阴性菌的外膜是一种屏障,可以保护细胞壁不受溶菌酶的影响,但这种保护似乎只是部分的,而且在菌株之间是可变的(Masschalck et al. 2001)。原菌对溶菌酶具有耐药性,因为它们的细胞壁是由肽聚糖以外的其他物质组成的。然而,即使在革兰氏阳性菌中,也有一些菌群(如放线菌)对溶菌酶具有相对耐药性(Barsotti et al. 1988)。结果表明,溶菌酶对放线菌细胞壁的渗透作用只有部分,而溶菌酶与无色肽酶的结合作用更有效(FISH的固定细胞渗透作用;Sekar et al. 2003)。溶菌酶被SDS抑制(Smith and Stoker 1949),这是一个很好的理由,可以使用溶菌酶和SDS的顺序,而不是一次一步。溶菌酶也被用于提取真菌DNA (Claassen et al. 1996;Landeweert et al. 2003),这并不像听起来那么荒谬:溶菌酶已被证明具有几丁质溶解活性(Pooart et al. 2004;Takeshita et al. 2004),可能是因为有两个不同的活性位点(Takeshita et al. 2003)。

无色肽酶是从溶色杆菌中提取的一种蛋白酶,它通过分裂细菌的肽交叉键来攻击其肽聚糖层。商用的溶菌色肽酶试剂可能同时含有水解蛋白酶和水解蛋白酶,也可能含有其他蛋白酶(Li等,2000年)。α蛋白酶攻击多糖-肽键以及D-Ala-Gly和Gly-Glu键(Li et al. 1997);-蛋白酶裂解甘氨酸- x肽键(Li et al. 1998)。无色肽酶的特点是具有非常高的蛋白水解活性、宽的pH值范围和高的变性稳定性。例如,在0.1% SDS和5m尿素的存在下,褪色肽酶保持了较高的活性(Tsunasawa et al. 1989)。抑制了螯合剂乙二胺四乙酸和邻菲罗啉)已经被观察到,然而,这表明变色肽酶是金属蛋白(Li etal . 2000)。因此,避免EDTA(或其他螯合剂)作为色肽酶鸡尾酒的添加剂可能是明智的。尽管褪色肽酶似乎相当不特异,但该酶(与溶菌酶结合)被证明能使某些革兰氏阳性细胞(属于小单孢菌属)完好无损,而其他细胞则被有效裂解(Frostegard et al. 1999)。

其他酶有时与肽聚糖靶向酶结合使用,以帮助后者获得肽聚糖层。因此,蛋白质蛋白丰富的胞外物质已被蛋白酶K或mutanolysin靶向。脂肪酶和mutanolysin被联合使用来裂解炭疽芽孢杆菌的孢子(Sjostedt et al. 1997)。使用脂肪酶的原因尚不清楚。Mutanolysin是一种具有高特异性的裂解酶,可裂解某些革兰氏阳性菌,但不能裂解革兰氏阴性菌(Yukogawa et al. 1974;radadadi等人。2004)。

Novozym 234 (Novo, Denmark)是从哈兹木霉(Trichoderma harzianum)中提取几丁质分解酶的混合物,它能有效地溶解真菌细胞,已被用于生产真菌原生质体(Robinson和Deacon 2001),并从培养物(Varma和Kwonchung 1991)和土壤(Porteous和Armstrong 1991)中提取DNA。混合物中含有DNA酶,它会降低DNA产量,除非受到抑制(Varma and Kwonchung 1991)。

继续阅读:土壤中酶的提取

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反应

  • VALDEMAR
    无色肽酶和溶菌酶的作用是什么?它们有什么不同?
    6年前