微卫星不稳定
获得的染色体异常
人类基因组天生不稳定，突变发生的背景率很低。大多数这些变化是致命的，不能存活或无害，因此异常缺失类型严重区域22q11.21-11.23胸腺发育不良或发育不全伴有细胞免疫缺陷的t细胞数量减少甲状旁腺功能减退症心脏异常微妙的畸形特征速度心面综合征异常缺失类型严重区域22q11.2长脸光滑…
Pcr组件
PCR的核酸模板聚合酶链式反应从DNA模板(基因组DNA或RNA衍生的cDNA)中扩增特定的序列，这些DNA可以从不同的样本来源中制备(图2)。该DNA可以是直接从实验或患者材料中分离的基因组DNA，也可以是通过聚合酶或逆转录酶从DNA或RNA模板中合成的cDNA。生物材料的各种来源可用于制备……
目标Vs信号放大
核酸可以用靶标或信号放大方法．简单地说,目标放大酶作用增加目标分子的数量。简而言之，在一天结束的时候，有更多的靶向核酸分子。相比之下，信号放大并不增加目标，而是使用高灵敏度的报告分子或探针来检测目标。例如，在信号放大中，一天结束时存在相同数量的分子，但是……
Dna测序
DNA测序被认为是突变检测的金标准。然而，在继续描述方法和技术之前，重要的是要指出测序并不是完美的，它当然也不是魔术。像任何分析方法一样，人们可能会遇到假阳性和假阴性。然而，当正确地完成和正确地解释，测序一个DNA片段几乎总是能揭示一个高百分比，接近100的序列变异....
杜氏肌萎缩症
杜氏肌营养不良症是一种神经肌肉疾病，也涉及基因缺失和复制。DMD是一种破坏性的、进行性的肌肉损耗疾病，通常在3岁前无法确诊，但通常会导致患者在12岁前坐轮椅，在20岁出头时死亡。本病表现为肌肉假性肥厚、关节挛缩、脊柱侧凸、呼吸损害、心肌病，血清肌酸激酶CK明显增高。
参考文献
药物基因学和个性化医疗。Fundam。中国。药理学杂志，16(5)337-342,2002。2.药物基因学与医疗实践的未来。中华分子医学杂志，32(3):394 - 394。3.Meisel, Gerloff, T, Kirchheiner, J，等。药物遗传学对个体化药物治疗和研究设计的影响。 J. Mol. Med. 81(3) 154-167, 2003. 4. Prows, C. A. and Prows, D. R. Medication selection by genotype how genetics is changing drug prescribing and...
南方的污点
DNA印迹是Southern在1975年开发的(3)，它仍然是许多研究人员选择的方法，从分子诊断为临床实验室，第二版编辑的W. B. Coleman和G. J. Tsongalis Humana出版社公司，托托瓦，新泽西州的特定DNA序列可靠的定量检测。Southern blot可以检测异种间同源基因的存在。例如，如果在老鼠体内找到了一个生物学上相关的基因，就有可能……
电泳的Restrictiondigested
核酸在中性pH值下带负电荷，这使得它们可以通过电场迁移。琼脂糖是一种高度多孔的多糖，可以充当筛子，允许DNA片段根据长度被分离。在低电压条件下，所有元件的电阻保持恒定，线性DNA片段以与施加电压成正比的速度通过琼脂糖凝胶。核酸在细胞内迁移的驱动力。
Mendellian遗传模式
单基因疾病的遗传模式是基于传统的孟德尔分离和独立分类定律。根据这些规律，我们可以做出以下假设:1 .一个后代从双亲各继承一条常染色体，因此，从双亲各继承一个等位基因。2 .无论遗传与否，这两个等位基因的表达是相等的，杂合子可以以相同的频率将其中一个等位基因传递给后代。
基于pcr的Dna甲基化检测方法
亚硫酸氢盐修饰原始DNA中存在的任何甲基化信息，一旦DNA在体外被扩增，就会丢失。因此，为了用PCR研究甲基化，DNA必须以某种可以复制的方式被修改。亚硫酸氢钠处理，脱氨胞嘧啶为尿嘧啶，已成为改性的首选方法。5-甲基胞嘧啶向胸腺嘧啶的脱氨速率比胞嘧啶向尿嘧啶的转化速率要慢得多(49)。亚硫酸氢…
Dna甲基化的诊断应用
DNA甲基化作为恶性疾病的标记肿瘤显示出特定类型和亚型的甲基化标记的特征图谱癌症(32, 97)。因此，使用甲基化作为肿瘤特异性标记物具有相当大的潜力(98)。甲基化标记可能是最好的dna标记，因为在大多数癌症中没有已知的有用的高频、单位点突变。选择正确的高频甲基化基因，肿瘤细胞或…
核酸外切酶测定
实时聚合酶链反应是唯一的纯基于聚合酶链反应的突变检测方法，因为它不需要任何辅助技术，如电泳。如本节所述，PCR在反应管中直接监测，PCR引物本身被设计为针对一个或多个特定序列。因此，real-time PCR只用于检测之前描述的由其他技术发现的突变。在实时聚合酶链反应中指数期PCR是……
非酶的信号放大
来自Digene公司(Gaithersburg, MD)的混合捕获套件可用于检测HPV、CT GC和HSV。全长RNA探针用于检测hpv并确定其是否具有图6。非酶的信号放大．图6所示。非酶的信号放大。致癌风险高或低。全长探针否定了潜在的假阴性，因为snp不抑制杂交。混合病毒DNA与…
Enzymaticbased信号放大
另一个类别的信号放大分析利用酶的反应，可以检测目标的构象变化。这类方法中最常用的方法是使用Cleavase酶，它可以在Invader试验(Third Wave Technologies, Madison, WI)中使用线性探针检测单碱基对变化(43,44)，而另一种方法(RAM)结合RCA和链位移扩增来扩增作为报告分子的圆形DNA探针(45)。3.2.1之上……
Snp类型的传统方法
历史上，许多不同的SNP分型方法已经在研究和临床实验室中使用。SNP分型最早的方法之一是聚合酶链反应-限制性片段长度多态性PCR-RFLP，当SNP产生或消除限制性片段长度位点时，可用于基因分型。该技术是这样进行的:用侧翼引物扩增感兴趣的区域，然后用适当的酶消化PCR产物和分解…
临床凝血实验室的分子检测
分子诊断在凝血检测中的应用主要局限于血栓患者，这一领域的实验室检测在过去几年稳步增长。遗传嗜血栓性疾病的分子诊断的有效性取决于潜在的分子缺陷。基于他们独特的分子异常，FVL突变，凝血酶原G20210A突变和MTHFR突变都使他们自己相对…
标记核酸探针的制备
一旦核酸被粘贴到膜上，就可以通过与与同源RNA或DNA结合的标记的、变性的单链探针杂交来检测特定的序列。这些探针可能由RNA或DNA组成，标记方法可能是放射性的或非放射性的。11.1.尼克翻译标记翻译的方法依赖于大肠杆菌DNA聚合酶我一种聚合酶，也具有5' 3'外切酶活性，可降解…
Dna微阵列平台
在接下来的小节中，我们将通过详细介绍两种最常用的DNA微阵列平台来开发第2节中介绍的DNA微阵列模型。cDNA阵列的基本原理与Schena和Brown最初描述的一致。作者们通过提供构建一个机器人观测器来生产DNA芯片，一个扫描仪来分析它们，以及运行实验的软件的协议，帮助确保了这项技术的广泛传播(17)。有了这些协议…
增加Pcr的特异性和敏感性
有几种方法可以提高各种PCR应用的特异性和敏感性。其中一些方法使用专门的试剂，而另一些则采用改进的PCR循环参数或寡核苷酸引物设计的变化。5.1.改进的TAQ聚合酶制剂在过去十年中出现了一些专门的PCR试剂，其功能得到了改进PCR特异性．其中包括Taq聚合酶的特殊制剂。聚合酶有……
宪法的染色体异常
染色体异常很常见。大多数与生命不相容，自然流产。超过50个早期SABs有异常的核型21。染色体异常胎儿的损耗率随着妊娠的进展而降低，大约5个死产21和较小比例的足月分娩染色体异常。染色体异常是重大出生缺陷的重要原因。性染色体的异常通常会好一些。
简介
国会在1967年的《临床实验室改进法案》中制定了一个确保实验室质量的框架。由于公众对美国临床实验室检测质量的关切，国会通过了1988年《临床实验室改进修正案》(CLIA'88)，规定了为健康目的对人体标本进行检测的所有实验室的统一质量标准。实验室必须在卫生与公众服务部登记
测试过程的质量控制和质量保证
每个分子诊断实验室都应该制定一个全面的书面质量保证程序。质量保证程序的目标是客观、系统地监测和评价检测结果的质量和适当性。质量保证程序应处理测试过程的每一个方面，即分析前、分析和分析后过程。该计划必须包括教育和培训的书面政策和文件。
分析验证
在将一种新的或改进的LDT引入实验室菜单之前，需要在实验室条件下仔细评估该分析方法的性能特征。除了评估这些特征之外，进行分析验证还可以为引入LDA之前必须解决的实用性问题提供有用的信息。重要的是要指出分析验证程序的性能一直具有挑战性……
丙烯酰胺微卫星
检测突变和序列变异heteroduplex分析CFTR基因。用PCR扩增CFTR基因外显子10进行异质双工分析。凝胶1.5毫米厚，40厘米长1X MDE Cambrex Bio Science Walkersville, Inc.，含有15个尿素。凝胶在0.6X Tris-borate-中注入21,000 V-h乙二胺四乙酸缓冲液和溴化乙锭染色。通道1和13个大小标记100个基点阶梯,巷2毫米纯合子在470位置,巷3是一个结合体VV在470位置,巷4是一个杂合子M470V多态性,巷5是AF508突变纯合子,巷6是一个AI507野生型杂合子,巷7是一个复合杂合子AF508和I506V巷8复合杂合子AF508和F508C巷9是一个复合杂合子AF508和Q493X巷10是一个I506V野生型杂合子,11巷为F508C野生型杂合子，12巷为AF508野生型杂合子。异质双工和同质双工的对比。
多发性内分泌肿瘤型
多个内分泌肿瘤1型MEN1是一种常染色体显性性状，具有显著的家族内变异，特征为多发性肿瘤或内分泌腺增生(见OMIM 131100)。MEN1的定义是存在以下三种内分泌肿瘤中的两种甲状旁腺腺瘤或增生、肠胰内分泌肿瘤和垂体腺瘤。其他可能的表现包括类癌肿瘤，肾上腺腺瘤和脂肪瘤．MEN1基因是通过…
癌症中的染色体异常
大多数人类癌症(包括实体瘤、白血病和淋巴瘤)包含染色体异常，包括数量变化(非整倍体)和结构畸变(102,103)。这两种常见的染色体损伤可能反映了染色体不稳定性的两种不同机制(9104)(1)染色体数量不稳定(2)染色体结构不稳定。在某些类型的癌症中，染色体的不稳定性压倒了核苷酸序列。
三核苷酸重复障碍
最初描述于1991年(1)的三核苷酸重复扩增是许多神经系统疾病的原因，包括脆性X综合征(FRAXA)、肌强直性营养不良(DM)、脊髓和球肌萎缩(SBMA)、亨廷顿氏病(1HD)、弗里德赖希共济失调(FRDA)、脊髓小脑性共济失调(SCA1、SCA2、SCA3、sc6、sc7、sc8和sc12类型)和牙髓- pallidolusian萎缩(DRPLA)(2-5)。许多其他罕见的SCA形式继续在家族中被识别，但是……
遗传疾病的分类
目前，关于各种遗传基因的数量和特征有大量的信息。人类男性核型(g -带)，显示22对常染色体和2条性染色体(XY)。图1所示。人类男性核型(g -带)，显示22对常染色体和2条性染色体(XY)。插入子中断基因编码(外显子)序列的DNA序列卫星出现的短重复DNA序列…
单核苷酸多态性与疾病
由于许多疾病的突变已经被确认，SNPs在许多临床诊断环境中具有重要意义，包括但不限于(1)人类白细胞抗原(HLA)位点的广泛多样性，在实体器官和骨髓移植中很重要，(2)在血液抗原系统中发现的等位基因变异，从临床分子诊断…
Rna A的电泳分离
Northern blot分析方案见表3。当分析细胞总RNA时，凝胶上装载的RNA数量从5到30克不等。理想的浓度应根据经验确定，并取决于靶mRNA的数量和质量以及探针的特异性。纯化后的mRNA分析只需1.0 g就可以完成，尽管更多的量(5-10 g)通常用于单一膜的多次使用。只是之前…
染色体评估适应症
核型评估的原因因样品类型而异。羊水是产前评估的主要样本。基因羊膜穿刺术最理想的是在妊娠16周左右进行，当孕妇产生染色体异常胎儿的风险大于羊膜穿刺术本身的固有风险时，通常采用这种方法。早期羊膜穿刺术可在10-12周进行。进行羊膜基因穿刺术最常见的原因是……
阿尔西丁橙细胞染色
采用酸性苯酚萃取法从培养的大鼠肝上皮细胞中分离RNA。每个样品取两微克RNA，置于完整凝胶上，在90伏电压下运行2小时。Lane A包含RNA分子大小标准。B和C巷含有完整的RNA rRNA条带清晰可见，而D巷和E巷的样品已降解。D巷的RNA是用少量自来水而不是rnaase处理过的水制备的，E巷的RNA进来了……
Pcr反应的优化
许多不同的因素可以显著地影响PCR的敏感性和特异性，包括(1)寡核苷酸引物设计，(2)PCR循环参数(循环次数、循环次数、温度)，(3)PCR混合物的组成(Mg2+浓度)。对于大多数PCR应用，最关键的参数是所用寡核苷酸引物的退火温度。最大退火温度由Tm最低的底漆决定。超过……
将Dna转移到坚固的载体上
首次用硝化纤维素3进行了核酸的膜固定化和杂交。然而，硝化纤维素并不是理想的核酸杂交材料。因为核酸是通过疏水作用而不是共价作用附着的，所以在高温下杂交和洗涤过程中，它们会慢慢地从硝化纤维素基质中滤出。此外，脆弱的硝化纤维素膜无法存活超过一两个循环……
实验室注意事项
细胞遗传学是用来检测人类染色体的重大异常，这些异常大到可以在光学显微镜下看到。要研究人类染色体，细胞必须在分裂，因为单个染色体只有在有丝分裂时才可见。常规分析在中期进行，尽管如前所述，可以使用更早的前期或前中期收集细胞的技术。除了骨髓，大多数来自分子…
异性双分析
sscp分析p53序列变异的检测。从四种不同的乳腺肿瘤细胞株和人胎盘(野生型对照)提取的DNA中扩增出p53基因外显子8的183 bp片段。将33p标记的dATP加入PCR中，对经0.5X MDE凝胶电泳分离的产物进行标记。1巷野生型对照巷2,MDA-MB-231细胞巷3,MDA-MB-468细胞巷4,Bt-474细胞巷5 SkBr3细胞。细胞系……
电泳原理
电泳是指带电分子在电场影响下通过液体或凝胶介质的迁移。区带电泳，即大分子通过多孔支撑介质或凝胶的迁移，在今天的分子生物学实验室中几乎被普遍使用。本章的所有讨论都将涉及区带电泳，但为了简单起见，我们将简称为电泳，它是一种强大的分离工具，能够检测到…
糖尿病的分子内分泌学
糖尿病是一个代谢综合征的特征是高血糖由各种各样的缺陷胰岛素分泌和行动。传统上，糖尿病被分为四类:1型糖尿病，其特征是绝对缺乏胰岛素，需要胰岛素治疗来维持生命。2型糖尿病，其特征是胰岛素分泌和作用的各种缺陷，不需要绝对的胰岛素治疗，尽管胰岛素可能是足够的…
南方印迹分析方法
DNA的制备用于南方印迹法的DNA纯化的大多数基本技术都能产生适合南方印迹法分析的材料。标准的Southern blot协议建议在分析单拷贝基因时使用10克DNA(6)。然而，当DNA的数量有限时，可以在不影响信号的情况下使用更少量的DNA，方法是在电泳过程中改变样品孔的几何形状(减小孔的宽度将增加最终的强度…
扩增难降解突变系统
所有pcr都依赖于将寡核苷酸引物退火到目标DNA的特定位点，从而促进独特序列的扩增。为了使聚合酶扩展引物，引物必须在其3'端完美退火到目标序列。扩增难降解突变系统(ARMS)利用引物的设计，使其3'端与突变核苷酸(40)上的两个备选项之一相匹配。ARMS非常适合探测…
直接Vs间接分子诊断试验
基因测试，通过DNA, RNA，染色体，或蛋白质，可为许多不同应用的遗传性疾病基因型检测提供关键信息。许多方法可以用于直接或间接突变分析。分子基因检测的大多数类型应用诊断检测在有症状的个体中对基因突变的检测，作为一种诊断辅助。新生儿筛查试验用于筛查人群…
微卫星不稳定性Rtpcr
作为起始材料的总RNA的纯度和完整性是生成高质量全长cDNA的最重要因素之一。杂向剂如氯化胍和异硫氰酸胍能够溶解细胞结构和蛋白质导致核蛋白迅速与核酸分离，使RNAse酶失活。用变态剂和还原剂从细胞中分离RNA的几个程序…
聚合酶链反应
在典型的PCR中，DNA聚合酶在体外从模板分子中复制目标DNA序列，进行连续的合成周期(图1)。每个周期的扩增产物为下一轮扩增提供新的模板。因此，目标DNA序列的浓度在PCR过程中呈指数增长。典型的PCR混合物包含(1)耐热的DNA聚合酶(Taq聚合酶)，(2)靶向特异的正向和反向…
神经纤维瘤病
神经纤维瘤病1 (NF 1)是一种常染色体显性遗传病，约有1 3500例患者。其特征是神经嵴起源的肿瘤。主要表现为咖啡色斑和皮肤或皮下神经纤维瘤(良性肿瘤)周围神经)．其他表现包括腋窝雀斑，Lisch结节(虹膜错构瘤)，脊柱侧凸，丛状神经纤维瘤，大头畸形，身材矮小癫痫和局部肥大。超过一半的人报告说……
故障排除北部的屁股
有些基因在某些细胞类型中没有任何水平的表达。然而，如果凝胶上包含一个已知的阳性对照，而没有产生阳性信号，这可能是一个技术问题。参考以下检查表以排除一些可能性:RNA质量好吗(完整凝胶，溴化乙胺染色)RNA电泳是否充分(RNA迁移bp梯)RNA转移到尼龙膜上(染色Was杂交时间…
多个热放大
多热连接酶链反应目标放大(特别是LCR)，使用高温来变性或解压缩双链DNA (dsDNA)靶标图5。与线性放大。图5所示。与线性放大。(26、27)。多个探针补充到目标的不同区域，然后在退火步骤中绑定到它们的特定目标。LCR反应的下一步在DNA聚合酶的最佳温度下进行，因此延伸或…
无监督学习
常用的无监督学习技术大致分为两类(分层和分区)，其中分层聚类应用较为广泛(90)。在考虑了以下机器学习的挑战之后，对分层聚类的偏好至少是两倍的。目前还没有可用的计算资源来解决许多机器学习问题。放弃寻找精确的解决方案，接受……
血小板糖蛋白
血小板与凝血因子协同工作以维持止血。在ACS中，血小板活化在冠状动脉血栓形成中起着重要作用。尽管纤维蛋白凝块在st段完全闭塞性AMI患者中占主导地位，血小板凝块在非st段AMI和不稳定型心绞痛患者中更容易发生部分闭塞16。在血小板表面发现了几种糖蛋白GP受体复合体，它们促进了…
凝固的概述
混凝的组成部分包括血管血小板、凝血因子及其辅助因子、纤溶蛋白蛋白质．因此，止血是血管亚内皮表面蛋白、血小板表面糖蛋白、促凝和抗凝蛋白以及纤溶蛋白之间的微妙平衡(3)。这些成分之间的相互作用导致了纤维蛋白凝块的形成和损伤部位的溶解。遗传还是……
脊髓性肌肉萎缩症
脊髓肌萎缩症(SMA)是一种常染色体隐性遗传病，载频为1.5倍，影响1 6000 ~ 1万名活产儿。因此，SMA是仅次于囊性纤维化的第二大常见常染色体隐性致死性疾病。在这种疾病中，前角细胞退化，导致低腹肌、对称肌无力和随意肌消瘦。儿童脊髓性肌萎缩症按发病年龄、发病率、发病时间、发病时间等分为I、II、III型。
寡核苷酸结扎试验
寡核苷酸引物退火到单链DNA的相邻位点，使它们之间没有间隙，就可以被DNA连接酶共价连接在一起。图3。多重结扎依赖探针扩增。图3。多重结扎依赖探针扩增。这是寡核苷酸结扎分析(oligoligotide ligigation OLA)的基础。连续的变性、退火和结扎循环导致目标序列的线性放大。在…
基因突变如何影响内分泌系统
所有的内分泌系统都由配体、受体、受体后信号分子、酶和蛋白质产物的相互作用网络组成。每一个蛋白质是由基因编码的，而这些基因，反过来又受转录因子网络的调控。任何相关基因的突变都可能导致特定系统功能的改变，从而导致疾病。这里将讨论一些说明疾病特定分子机制的内分泌疾病。
尤金·H·刘易斯三世迈拉·J·刘易斯·简·A·阿莫斯和格雷戈里·J·Tsongalis
囊性纤维化(CF)是一种临床异质性疾病，是美国首次开展成人人群筛查的遗传疾病。自从1989年CFTR基因被发现以来，人们对该疾病的病理生理学和分子遗传学有了更多的了解。这篇综述包括CF的遗传学概述，病理生理学的讨论，临床和解剖病理学，并以分子诊断学的综述结束。囊性纤维化是……
核酸印迹技术
本章介绍核酸印迹的基本概念和技术。许多涉及到南方印迹和北方印迹的技术是相似的。通过琼脂糖凝胶基质电泳，从原核或真核细胞中分离纯化的带负电荷的核酸。RNA或变性DNA随后被转移并固定在由硝化纤维素或尼龙组成的膜上。…
毛细管电泳
毛细管电泳(CE)是一种非常强大的仪器技术，它将自动化引入了临床分子实验室。该方法最初是由北卡罗来纳大学的Jorgenson和他的同事在1983年(7)描述的，它利用了最近开发的用于毛细管气相色谱的薄熔融二氧化硅毛细管柱中的电泳。在开放的试管中自由溶液电泳(无多孔基质)并不新鲜，有…
Rh血型
恒河- Rh血型系统包含由两个不同的基因RHD和RHCE产生的抗原，它们在染色体1上串联定位，被认为是通过单个祖先基因15,16的复制而产生的。RH基因在核苷酸序列水平上大于95个同源基因，均由10个外显子组成，长度超过75 kb，编码417个氨基酸残基多肽，预测分子量为30 ~ 35 kDa 17-19。大约有15个白种人…
母体污染与基因分型的敏感性
孕妇污染脐带血、绒毛膜绒毛和羊膜穿刺术样本是一个记录良好的问题，在进行产前基因检测的实验室中出现(79-82)。由于分子诊断方法的分析不能区分母体和胎儿的DNA，母体污染带来了胎儿基因型识别错误和可能误诊的风险。当我们考虑到细胞…
Dna测序在临床实验室中的应用
在临床分子遗传学领域，基于测序的突变分析的目标数量仅受限于人类基因组中的基因数量和与人类疾病相关的基因数量。虽然有些人不喜欢。平板凝胶测序与放射标记运行在突变扫描模式。放射自显像显示了8个患者样本，一个阴性对照(每次装载的最左边车道)和一个阳性对照，TGC到TAC在密码子609或C609Y在每个最右边车道。
流式细胞术的临床应用
流式细胞术在临床实验室的常规应用包括枚举人类免疫缺陷病毒(HIV)感染患者的外周血CD4+ t细胞，枚举外周血和骨髓中用于干细胞移植的CD34+干细胞，以及急性白血病、非霍奇金淋巴瘤和其他淋巴增殖性疾病的免疫表型表征。在某些情况下，肿瘤细胞的DNA含量或倍性状态是…
鱼类与其他细胞遗传学分析技术
由于灵敏度高、技术简单、适用于广泛的临床标本以及与表型表征结合的可行性等明显原因，FISH在常规临床诊断实践中受到欢迎。FISH，在利用细胞病理学和组织病理学能力基础的同时，提供了揭示细胞病理学基因组秘密的额外奇观。因此，细胞和分子生物学的这种结合是一个主要的…
临床验证
实验室方法为管理患者和解决相关临床问题提供信息。一种方法的有用性取决于该方法的分析性能和临床特征(临床敏感性、特异性和预测值)。最后这些因素是临床应用的特点，而不是检测的特性。测试的临床意义应根据疾病或综合症的主题来定义。
数据分析软件
对序列分析、数据挖掘和基因组学可用的生物信息学工具的全面讨论超出了本章的范围。这里的评论将仅限于自动测序器中基调用的软件。在某些方面，讨论必须是简短的，因为自动序列分析仪制造商使用的算法是专有的。然而，格林和他的同事已经开发了基本呼叫软件phred，它是非专利的，在…
癌症中的Dna损伤和分子改变
导致肿瘤转化的关键靶点突变可由外源性损伤引起(致癌物质辐射)或来自内源性诱变因素(45)。DNA损伤可由DNA分子的自发改变或众多化学和物理因子与DNA分子结构的相互作用引起。自发病变发生在正常的细胞过程中，如DNA复制、DNA修复或基因重排或通过DNA的化学改变…
鱼类细胞遗传学评估的临床意义
自从染色体异常与人类疾病如唐氏综合征、特纳氏综合征、慢性粒细胞白血病、APL等的关联的开创性证明，如前所述，其他一些先天性疾病和癌症都与特定的染色体异常有关。有了这些知识，再加上有效的细胞遗传分析工具、染色体条带和敏感的分子分析方法中的FISH，基因组疾病的管理正在看到光明。
一般程序
在原位分子检测技术中，最基本的影响因素是标本固定，它的作用是保存形态学和保留必要的靶核苷酸序列。常用的固定剂有福尔马林，Carnoy的固定剂甲醇醋酸，Bouin的苦味酸溶液和乙醇。其中，缓冲福尔马林似乎能最好地保存组织切片中的DNA和mRNA。福尔马林带来目标蛋白质和核酸……
最早的医学
早在实验室出现之前，对病人的评估就已经有了公认的做法。早期的保健提供者(并非都是医生)试图用任何可能的方法确定被评估者的健康状况。诊断和规定的治疗并不总是准确的或基于科学的声明。这一过程是由利他主义、虚荣、贪婪、科学思想以及哲学和宗教法令共同推动的。这不是说…
我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我
“我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我我图。4。Pronto化验。进行常规PCR，然后对未结合的dNTPs进行酶降解。然后将5'标记的引物退火到PCR和DNA聚合酶上，加入生物素化的dNTP。生物素化的dNTP只有在与目标扩增子匹配时才被添加到引物中。然后将反应混合物添加到链霉亲和素涂层的孔中，生物素化引物因此被绑定为非绑定引物……
血小板和中性粒细胞抗原系统的基因分型
新生儿同种免疫血小板减少性紫癜，血小板与HDN的对应物，发生的频率约为1 / 1100活产儿70。受NATP影响的婴儿有出血的风险，10-30例会在子宫内发生颅内出血，这可能导致脑损伤和持久的神经后遗症。目前有25种不同的血小板特异性异体抗原和与其他组织共享的抗原涉及引起NATP。母亲……
人类基因组
生物信息以三种基本形式存在:DNA、RNA和蛋白质．每一种都伴随着很大程度的结构和功能的复杂性。部分由于研究人员在重组DNA技术发展方面取得的重大进展和人类基因组计划前所未有的成功，我们现在有能力在核酸水平上对许多人类疾病提供直接和间接的分子诊断分析。人类基因组是……
实施实验室开发的测试
与任何其他临床检测相似，分子检测的主要目标应该是为患者护理提供必要的可靠和及时的结果。引入新的分子检测的主要目的是改善病人的护理。临床需要，以及基础和转化研究的进展，往往促使新的分子检测的发展。在测试选择过程中，有几个关键元素非常重要。有必要认识到，任何新的测试都应该……
临床试验的格式
在分子诊断实验室中，有两种主要的临床检测格式被广泛使用。一种形式是由体外制造商开发的测试，另一种是由每个实验室(LDA)开发的测试，也被称为自制测试。2.1.第一类测试由制造公司开发的试剂盒组成，为确定的整个分子测试的性能提供质量控制的试剂。
三核苷酸重复测量
在人类遗传学、生物化学和模型系统方面的基础研究和技术进步为理解人类传染病、遗传疾病和身体获得性疾病带来了很大的进步。事实上，在1991年，三元重复扩张疾病可以在一篇文章中描述，现在每种疾病的显著发展已经创造了大量的工作(4,5)。导致三联体重复疾病的一个因素是采用了不寻常的非b DNA结构…
分子检测的验证
监管机构已经确定了分子测定的验证和验证标准。1988年，美国国会通过了《临床实验室改进修正案》(CLIA '88)，为所有实验室检测建立了质量标准。该标准旨在确保人类患者测试结果的准确性和可靠性，无论测试在哪里进行。CLIA规则是基于所执行测试的复杂性。实验室检测是……
鱼类科技的发展
对全基因组分析的不断追求使FISH技术经历了一个显著的进步过程。下文描述了这一过程中的主要进展。5.1.多重多色鱼或光谱核型一种同时应用的精心选择的带有多个流感细胞标记的染色体绘制探针，使标记单个中期标本中的所有染色体成为可能。multi - color- fish (M-FISH)和SKY都有相同的用途，但在它们的…
原位杂交
原位杂交最初被描述为一种检测组织或细胞制剂中核苷酸序列(DNA和或RNA)的通用技术。然而，随着时间的推移，特别是FISH引入后，前者几乎成为信使RNA (mRNA)检测的同义词。正如McNicol和Farquharson(20)所评论的那样，ISH可以应用于多种多样的生物标本，具有不同的可视化系统，包括放射自显像，…
流式细胞术的一般原理
流式细胞术是一种使用荧光探针分析液体悬浮液中单个细胞的内在光散射特性，并同时评估一种或多种外在特性(例如，特定分子的存在)的技术。荧光探针可直接与目标分子结合(例如，DNA含量分析中的碘化丙啶)，或可将荧光染料偶联到抗体探针，以探测特定的…
故障排除南部的屁股
有几个问题可能会导致信号不能出现在最后的印迹上。为了帮助排除可能性，请参考以下检查表:是否有足够的DNA加载到凝胶上10 p,g 7电泳前是否彻底消化了DNA电泳DNA在转移前是否变性和中和了转移是否完成转移后对凝胶染色以评估残留DNA。DNA是否正确地固定在膜支架上?
人类基因组序列
典型的人类细胞的二倍体基因组包含约3x109个DNA碱基对，被细分为23对染色体22个常染色体和性染色体X和Y。长期以来，人们一直认为，识别人类基因组的完整序列将使研究人类疾病的遗传原因成为可能。实用的DNA测序方法出现在20世纪70年代中后期31-33年，大量的报告显示DNA序列对应于人类的片段…