单克隆抗体

Ouchterlony双扩散分析

当多克隆抗血清与大的聚合抗原反应时，如蛋白质或多糖，产生的交联通常会形成沉淀。如果允许抗原和抗体通过琼脂相互扩散，沉淀物将以可见线的形式出现。这项技术是由Oudin和Ouchterlony独立开发的，但Ouchterlony技术更方便，因此更受欢迎（Silverstein，1989）。典型的。。。

膜蛋白的增溶作用

在生物化学纯化和分析的经典技术应用于膜之前蛋白质，它们必须转化为水溶性形式。在少数有限和特殊情况下，膜蛋白的增溶作用可通过蛋白水解裂解从膜上分离，或在离子条件下发生相对较小的变化来实现。然而，在几乎所有其他情况下，完整和天然形式的膜蛋白增溶只能通过使用。。。

单克隆抗体片段化

在某些情况下，可能需要生成单克隆抗体的抗原结合片段。例如，当存在具有IgG Fc部分受体的细胞（例如巨噬细胞、单核细胞）时，完整IgG分子可通过其Fc部分非特异性结合（见第5.3.4节）。移除Fc将阻止这种绑定模式。IgM小片段（完整Mr 900000）的产生可能有助于穿透组织进行细胞化学研究。较老的。。。

蛋白质印迹

如本章前面部分所述，免疫沉淀分析有一些基本的局限性。很少有可能确切知道凝胶上的放射性条带是否代表抗体识别的多肽，或者它是否是沉淀的，因为它与另一个携带抗原决定簇的分子（可能是非放射性的）物理连接，免疫沉淀的第二个问题是，可能很难将抗原放射性标记为。。。

兔、羊IgG与葡萄球菌蛋白A和链球菌蛋白G的结合

IgG与蛋白质A已在第5.3.5节和第9.3.2节中讨论。兔抗血清具有明显的优势，它们的所有IgG在pH 7.4时与蛋白A结合，并且在pH 4.0时全部洗脱。这一事实可用于纯化兔IgG，并从Fc或未消化IgG中分离兔IgG的Fab和F（ab’）2片段（Goding，1976，1978）。蛋白A亲和层析是兔抗血清的首选方法。绵羊和山羊有两个IgG亚类。主要子类（IgGl）。。。

弗仑兹佐剂中抗原的制备

Freund全佐剂小瓶可从许多供应商处获得。重要的是，使用前摇动小瓶以恢复分枝杆菌。传统上，使用等体积的抗原（在水溶液中）和佐剂，尽管有人建议，如果每体积的水免疫原使用2-4体积的油（Hum和Chantler，…），则形成油包水乳液（而不是水包油，其佐剂作用很小）更可靠（无误），。。。

离子交换色谱法

离子交换色谱法是纯化免疫球蛋白，尤其是IgG的最简单和最有用的方法之一。它特别适用于单克隆抗体的纯化，因为简单的梯度洗脱可以在产率和纯度之间做出正确的折衷，而无需猜测。该技术温和，容量非常大。10 ml色谱柱可轻松处理100-200 mg蛋白质，恢复率应为100。现代离子交换树脂。。。

抗体亲和柱的使用

单个单克隆抗体可能具有完全不同的特性，不太可能在所有情况下都适用相同的结合和洗脱条件。单独检查每种抗体的结合和洗脱条件很重要。如果可能，最好测试一些具有相同特异性的单克隆抗体，并选择具有最理想特性的抗体。抗体柱上的亲和层析可分为五种。。。

抗原生化性质的测定

一般来说，自然产生的抗原是蛋白质或碳水化合物. 碳水化合物可能作为糖蛋白或糖脂等更复杂结构的一部分存在。缺乏碳水化合物的脂质很少被抗体识别，因为它们容易形成胶束和膜，从而从水环境中去除。确定抗原是蛋白质还是碳水化合物的初步步骤可能涉及许多简单的测试。蛋白质抗原可能。。。

抗体与荧光色素的结合

以前，个体研究人员通常会制备自己的荧光抗体结合物。这一次几乎已经过去了。商用荧光抗体的质量已大大提高，在大多数情况下，最好购买现成的结合物。尽管如此，这里将给出共轭程序，因为有时在特殊情况下仍然需要制备共轭物。抗体与合成抗体的结合。。。

淋巴细胞发育概况

在Gowans开创性工作之前，人们认为淋巴细胞与免疫系统. Gowans证明淋巴细胞是免疫系统（Gowans等人，1962年Gowans和McGregor，1965年）。像所有的造血细胞一样，淋巴细胞在整个生命周期中都是由身体产生的，在成熟之前要经历一系列复杂的分化步骤。淋巴细胞分化可分为两个阶段。第一阶段涉及分化。。。

缩写词表

7-氨基-4-甲基香豆素-3-乙酸次黄嘌呤，氨基蝶呤，胸苷jV-2-羟乙基哌嗪-iV'-2-乙烷磺酸次黄嘌呤鸟苷磷酸核糖转移酶高效液相色谱相对分子质量分子量非平衡pH梯度电泳对异硫氰酸罗丹明衍生物

噬菌体展示文库

Smith（1985）首次证明肽库可以显示在丝状Fd噬菌体的表面。这项工作随后如图14、3所示。单链抗体或Fab片段融合表达的典型结构蛋白质使用Fd噬菌体的基因III外壳蛋白，使用单个载体编码两条链。图14,3。表达单链抗体或Fab片段作为融合蛋白与Fd噬菌体基因III外壳蛋白的典型构建，使用单个载体编码两条链。。。。

石蜡包埋的自动化处理

组织处理的目的是将组织嵌入足够坚固的固体介质中，以支持组织，并使薄片切割时对组织或刀的损伤很小。常规组织学最令人满意的材料是石蜡。在将组织加工成石蜡之前，需要将其充分固定。虽然脱水酒精可以完成组织小碎片的固定，但较大碎片可能无法固定，因为其固定速度较慢。。。

免疫球蛋白同种异型

同一基因等位形式的产物被称为异源型。现在已知所有老鼠重链的同种异型（Stall，1995）。目前还没有已知的血清学检测到的小鼠k链同种异体。小鼠XI链的恒定区域显示BALB c和SJL小鼠之间的单一氨基酸差异（Arp等人，1982）。在大鼠中，k链显示出广泛的多态性，并且还描述了a、y2b和ylc链的变体（Gutman，1986年Bazin等人，1990年）。。。。