聚合酶链

探针标签

简并寡核苷酸引物由6-12个核苷酸组成,每个位置含有四种脱氧核苷三磷酸盐的每个组合,可在实验室制备(Sambrook等人,1989年)或商业购买。这种寡核苷酸引物非常异质,能够在用于探针的模板上的许多位置进行杂交。DNA聚合酶,添加了三个未标记的dNTP和一个a标记的dNTP。如果模板是单链DNA,则。。。

放大器分析

凝胶电泳后与标记的DNA探针杂交已用于验证特异性扩增产物。如果选择引物对使扩增子大小相差50-100 bp,则可以使用琼脂糖凝胶电泳来解析M-PCR扩增子。图1显示了通过M-PCR产生的淋病奈瑟菌390 bp扩增子和沙眼衣原体241 bp扩增子的分离和鉴定。使用特征良好的M-PCR检测,很少或没有非特异性扩增。。。

化学发光检测系统

碱性磷酸酶二氧六烷化学发光系统已用于多种DNA杂交分析,用于检测感染性的选定研究,这些研究使用化学发光检测病毒,沙眼衣原体和其他微生物,猫传染性腹膜炎病毒,葡萄树克隆病毒,乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒单纯疱疹病毒Musiani et al.(1991a,1992)(DX)Yang et al.(1991)(DX)Yang et al.(1991)(DX)Vlieger et al.(1992)(LU)Bronstein。。。

DNA片段转移到膜上

如Southern所述,DNA片段转移到膜上是通过硝化纤维素和向上毛细管转移实现的。自1975年以来,已经进行了一些修改,以简化、加速和提高印迹的敏感性。最显著的改进是固定膜本身。虽然硝化纤维素仍在许多实验室使用,但尼龙膜有几个优点,包括更高的拉伸强度、优异的核酸结合力。。。