原位杂交
方法和协议
由Paul T. Sharpe和Ivor Mason编辑的分子胚胎学方法和协议英国伦敦国王学院Guy’s, King’s and St. Thomas’s医院牙科和医学院，该书的原始版本中的一些图像无法包含在netLibrary电子书中。地址:999河景路208室，新泽西州托托瓦07512版权所有这本书的任何部分都不得转载，不得储存在检索系统中……
小鼠移植后胚胎的培养
使用移植后哺乳动物胚胎的一个主要缺点是，当它们在母体子宫内发育时，相对难以进行实验。有两种技术可以在很大程度上绕过这个问题。第一种是本章的主题，可用于妊娠7.5 d (E7)至12.5 d (E12)之间移植的小鼠胚胎，包括从子宫中解剖胚胎并在滚轮瓶中培养(1)。
彼得·D·柯里，托马斯·F·席林，菲利普·W·英厄姆
我们描述了一种标准化的诱变方案和一种方法，用于对斑马鱼基因组在特定发育过程中的突变进行小规模定向筛选。这些方法主要是基于德国图宾根、马萨诸塞州波士顿和尤金的大型屏幕开发的方法，以及我们在小型设备上的经验。通过将基于标记的筛选方案与单倍体和二倍体筛选方法相结合，可以有效地恢复特定的突变体。
记者转基因设计
当设计一个转基因报告结构时，仔细的计划是最重要的。转基因动物的生产和分析是劳动和时间密集型的，一个设计良好的结构将为你计划后续的实验提供一个良好的基础。尽管给定的报告的确切布局取决于实验的目标，但应该考虑到某些一般的考虑。下面将对此进行讨论。1.一个转基因报告需要…
通过精子核移植到未受精卵中的转基因参见注释
注射两到四个成年女性青蛙移植前用500-800 U HCG在背侧淋巴囊内孵育12-16 h。2.在移植针内部涂上乙状酸乙酯，防止精子核在针内流动时发生剪切(可在使用前10分钟至数月涂上)。附约1厘米的Tygon管(R-3603 1 32英寸。费舍尔,猫。将14-169-1A)末端的一个塑料移液器(200l)尖端，并用移液器拉起…
肢体再生的阶段和主要特征
图1显示了成年蝾螈肢体的桡骨中端和尺骨(椎足位)或肱骨中端(茎突位)截肢后的一系列示意图。这强调了几个原则无论截肢的程度如何，再生的是被切除的东西的完美复制无论截肢的程度如何，再生的阶段都是一样的从下臂再生比从上臂再生完成得更快。后一种情况的发生是因为有更少的组织…
显微摄影
用于显微摄影的相机通常包括一个标准的单镜头反射(SLR) 35毫米相机机身，通过一根管子安装到显微镜上(使用自己的整体曝光计)，或由一个特别设计的单元组成，集成到专用的显微显微镜(通常有更复杂的曝光控制，可以使用35毫米或更大的胶片)。虽然胶片仍然广泛使用，但数字图像采集越来越普遍....
化工产品和解决方案
100汉克(1)0.137 M NaCl, 5.4 mM KCl, 0.25 mM Na2HPO4, 0.44 mM KH2PO4, 1.3 mM CaCl2, 1.0 mM MgSO4, 4.2 mM NaHCO3。它是由可以保存几个月的原液制成的。碳酸氢钠溶液是新鲜的。溶液1:8.0 g NaCl, 0.4 g KCl溶于100毫升水。溶液2:0.358 g Na2HPO4, 0.6 g KH2PO4在100毫升水中。溶液3 0.72 g CaCl2溶于50毫升水中，溶液4 1.23 g MgSO47H2O溶于50毫升水中。Hank's预混液按顺序组合如下:10ml溶液1 mL溶液…
文化的分析
在培养后，外植体内的细胞分化模式可以通过免疫组化或原位杂交技术进行检测(图2)。在这两种情况下，外植体可以直接在凝胶中进行切片，然后进行分析，或进行全贴标处理。对整个安装进行分段还是加工的决定很大程度上取决于探头。与强图1。三维胶原凝胶培养示意图。侧视图，显示外植体位置…
文化媒介的制备
重要的是，大鼠和脐带血在收集后尽快旋转，最好是在凝血开始之前。通过挤压纤维蛋白凝块获得的血清称为立即离心血清。2.作为培养基补充的血清应具有较低的脂质含量，透明而不是浑浊。溶血血清不支持小鼠胚胎的正常培养。3.在NUNC载玻片的第一个孔中的培养基被用来清洗一次胚胎，然后转移到…
Oligo处理后的滚筒瓶培养
我们的实验室最近报道了用一种用于哺乳动物发育的滚轴管方法成功培养小鸡胚胎的消息(13)。这允许更多的正常发育(30个以上的体细胞)，可能是因为胚胎外的血血管供应与卵中一样丰富，而在环培养中则不会发生。我们现在有证据表明，简单地将硫代低聚物添加到这些培养物中，就可以保持对同样的基因的干扰，这些基因已经成功地……
克劳迪奥·D·斯特恩1介绍
1924年，Spemann和Mangold(1)的著名论证表明，当移植到宿主胚胎的异位部位时，泌胃两栖动物胚胎囊胚孔的背唇具有诱导第二轴的独特能力。不久之后，Waddington(2,3)表明，Hensen结在羊膜中与之相当。在将该区域移植到兔、鸭和鸡胚胎种间组合的异位部位后，他发现第二轴发育了，神经系统……
玛丽·艾米·蒂利特凯瑟琳·齐勒和妮可·勒杜阿林
细胞标记技术可以追踪特定细胞及其子代，从而研究它们的行为和命运，这极大地促进了对胚胎发育所必需的几种机制的理解。细胞标记物必须精确、稳定，不能干扰正常发育。鹌鹑鸡标记技术完美地满足了这些要求。方法(1)的原理是基于观察到在所有的胚胎和成年细胞中…
从H2KbtsA58转基因小鼠中直接获得条件永生成肌细胞
肌源性细胞移植已被讨论为肌肉和其他组织中遗传性疾病的一种治疗方法(75,76)，也有望作为研究体内肌肉基因表达调控的工具。然而，这些技术的充分利用存在两个主要障碍:原代成肌细胞有限的有丝分裂能力限制了克隆中可获得的细胞数量，而已建立的成肌细胞系的致瘤倾向使其难以使用……
引物设计
在设计简并寡核苷酸引物时，有许多因素需要考虑。这将用简并RT-PCR分离鸡激活素II型受体为例加以说明。图2(3)显示了小鼠和果蝇的激活素II型受体的氨基酸序列。在这些家族成员之间有许多区域是很好的保守的，而被选择用来制造引物的氨基酸序列…
来自转基因动物的细胞系
一种确保实验中产生的所有细胞系包含相同的不朽基因整合位点的方法是从转基因动物中创造细胞系。由于所有来自这种动物的细胞将共享相同的插入位点，至少这种细胞系生物学上的变异来源将受到更严格的控制。人们从最早的研究中认识到从这种转基因动物中制造细胞系的可能性。
脑室注射逆转录病毒
将描述使逆转录病毒注射到胚胎小鼠和大鼠的端脑室的程序。基本程序可适用于将逆转录病毒注入其他结构，如眼睛(15)或嗅觉上皮(16,17)。在小鼠的胚胎d 11和15之间以及大鼠的胚胎d 13和17之间，脑室内注射逆转录病毒是最容易的。提前或晚于规定时间注射都很困难，因为子宫…
材料
倒置显微镜，例如，尼康透热显微镜，日本东京，具有以下特点b.工作距离长的冷凝器。c.一个固定的舞台，当对焦时，物镜而不是舞台移动。d. 10倍放大率目镜。e. 4倍物镜用于低倍率工作。f. 40x微量注射物镜。g.合适的物镜Nomarski差分干涉对比DIC光学最适合可视化蛋的内部结构。DIC光学元件很贵，而且……
组织相互作用分析中的器官培养
上皮和间充质组织之间的相互作用是调节大多数胚胎器官发育的中心机制。研究这种相互作用的性质需要分离相互作用的组织，并在不同类型的重组外植体中跟踪它们的发展。这些组织既可以移植，在体内继续发育，也可以培养成…
用亲脂膜染料荧光葡聚糖和辣根过氧化物酶HRP进行神经元示踪
中枢神经系统中神经元及其轴突的组织周围神经系统可使用荧光或非荧光染料的顺行和逆行示踪技术进行检查。亲脂性膜染料，如DiI，其优点是既可用于固定组织，也可用于活组织，而细胞内染料，如荧光葡聚糖和HRP，在一定程度上依赖于轴突转运机制，因此对活组织效果最好。原则是。
亲脂性膜染料的命运图谱
亲脂性膜染料DiI是跟踪卵中相邻细胞的相对小群命运的首选染料。乍一看它很贵(100毫克190)，但100毫克确实很有用。DiI，像其他碳氰膜染料，如DiO和DiA(分子探针D-275和D-291)，是亲脂性的，因此，在应用到组织后，它很容易和优先扩散到细胞膜，而不是停留在水溶液中扩散。
杀死老鼠
建议用断颈脱位法杀灭小鼠。这是迅速的，并使动物造成最小的痛苦。抓住老鼠尾巴的底部，把它拿起来，放在笼子的顶部。允许它跑开，这样动物就会伸展开来，后腿几乎在空中，前肢紧紧抓住笼子的栏杆。用钝器用力压住头骨底部，拉住它的尾巴。伸展动作扭断了脖子，……
RNA的准备
对于胚胎组织RNA的制备，我们通常使用一种叫做RNA STAT-60的商业试剂。这一过程基于Chomczynski和Sacchi(11)所描述的方法，但RNA STAT-60试剂中含有硫氰酸胍和苯酚，以便于处理。其他制造商提供类似的试剂，结果相同(见注释10)。1.在加入提取试剂之前，应收集胚胎组织并在冰冷的PBS中洗涤。如果组织……
精子核制备
我们通常遵循Murray(4)的标准方案，但在许多步骤中省略了蛋白酶抑制剂leupeptin和苯甲基磺酰氟，以避免转移到最终的混合物中，并在卵子注射时稀释。1.解剖并分离雄性动物的睾丸a。将雄性动物麻醉在一个桶中，桶中含有一升0.1 Tricaine (MS222，氨基苯甲酸乙酯，Sigma a -5040)和0.1碳酸氢钠，麻醉至少20分钟(将动物浸泡在冰水中……
神经板外植体
如图14所示，神经板可以从下层的背侧中胚层干净地切除。使用上述方法(图4B)将眉尖只推过神经板，神经板由上皮细胞和在这些阶段(11-12.5阶段)的一层深层细胞组成。神经板的深度是由经验决定的，判断眉毛的深度是两个细胞深，停留在浅的一侧。眉梢是用来…