方法和协议

Paul T.Sharpe和Ivor Mason编辑

分子生物学方法™

分子胚胎学方法和方案

Paul T.Sharpe和Ivor Mason编辑

英国伦敦国王学院盖伊医院、国王医院和圣托马斯医院的牙科和医学院

Humana出版社^新泽西州托托瓦

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©1999 Humana Press Inc.999 Riverview Drive,Suite 208 Totowa,New Jersey 07512

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本出版物印刷在无酸纸上。“-”-J ANSI Z39。48-1984(美国标准协会)图书馆印刷材料用纸的永久性。

封面插图:Paul Martin和David L.Cockroft第2章“移植后小鼠胚胎的培养”中的图7A。吉尔·诺格雷迪的封面设计。

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美国印刷。10 9 8 7 6 5 4 3 2 1

国会图书馆在出版物中编目数据标题下的主要条目:

分子生物学方法^。

分子胚胎学:方法和方案/由Paul T.Sharpe和Ivor Mason编辑。

p、 厘米~(分子生物学方法^;97)包括索引。

ISBN 0-89603-387-2(碱性纸)

胚胎学脊椎动物方法学。化学胚胎学方法学I.Sharpe,Paul T.II。Mason,I.III.系列:分子生物学方法(新泽西州托托托瓦);97、QL959。M65 1998 571.8'616-dc21 98-23234

前言

大多数人对胚胎有一些兴趣;这在一定程度上可能是由于他们对了解自己及其后代的生物学起源感兴趣,并且越来越担心污染等环境变化会如何影响人类发展。显然,伦理考虑排除了对人类胚胎的实验研究,因此,发育生物学家转向其他物种来研究这一过程。幸运的是,从过去二十年的实验胚胎学中得出的最重要的结论是,在脊椎动物和无脊椎动物中,同源或密切相关的分子被部署来介导相似的发育过程。调节大多数动物基本过程的分子机制,如轴向模式或轴突导向,在进化过程中经常保持不变。(现在人们普遍认为,门和类之间的差异是新基因的结果,主要是由现有序列的重复和分化引起的,从而调节衍生性状的外观。)

其他脊椎动物显然最有可能使用与人类相同的发育机制,在脊椎动物亚门内,发育机制的明显保护程度相当高。人们早就认识到,特定的脊椎动物物种要么在研究特定的发育阶段方面具有明显的优势,要么特别易于进行特定的操作。没有一种动物能提供所有的答案,因为不是所有类型的实验都能在一个物种上进行。传统上,发育生物学家只研究果蝇、非洲爪蟾或小鼠等动物的特殊实验爱好。在过去几年中,这种情况开始发生变化,现在越来越多的实验室获得了研究几种不同动物的专业知识,因此能够利用不同发育系统的实验优势来解决特定的发育问题。或者,发育生物学系正在组织起来,以便在几种模式生物方面拥有专业知识。随着项目的进展,越来越需要能够在不同脊椎动物类的胚胎之间移动,这促使我们-

semble分子胚胎学:方法和方案。我们希望这将使研究人员熟悉各种常见的脊椎动物胚胎,对最适合他们研究的胚胎做出明智的选择,并了解可能操纵它们的技术。

遗憾的是,当这本书即将出版时,它的作者之一奈杰尔·霍尔德去世了。奈杰尔是一位优秀的发育生物学家,是国王学院发育生物学研究小组的创始人,最近被任命为伦敦大学学院解剖学和人类生物学系主任。他既是我们的同事也是我们的朋友,也是这本书的许多其他贡献者的朋友。非常想念他。

PAUL T.SHARPE IVOR MASON

色板列表

色板1-12显示为第368页之后的插入物。

板1(第37章图1)。构建消减cDNA文库或消减探针的步骤示意图。板2(第23章图1)。鸡胚神经板中用Dil和DiA标记的细胞。

板3(第48章图1)。吖啶橙染色和TUNEL法检测鸡胚菱脑神经嵴细胞凋亡。

板4(第51章图4)。(1) 色温:钨照明下蓝色滤光片对试样的影响。(2) 伪彩色:在黑白数字图像中使用伪彩色的三个示例。

板5(第45章图1)。石蜡包埋组织的非放射性原位杂交结合免疫组织化学染色。

板6(第29章图1)。斑马鱼的网状脊髓复合体。

板7(第46章图1)。从转染的周围神经再生轴突。

板8(第46章图2)。周围神经切断后的雪旺细胞。

板9(第10章图1)。骨骼肌组织发育过程中肌生成素基因表达的动态进展。

板10(第15章图9)。第8阶段(HH)(28-34小时)。

板11(第15章图3)。第7阶段(HH)(26-30小时)显示了脊索旁中胚层第一对体节的分割。

板12(第42章图1)。以小鼠cDNA序列为探针,将Fgf-8原位杂交至20期鸡胚。

目录

前言五

色板清单七

贡献者十三

第一部分小鼠胚胎1

1 3

小鼠作为发育模型Paul T.Sharpe

2 7

小鼠移植后胚胎的培养Paul Martin和David L.Cockroft

3 23

组织相互作用分析中的器官培养Irma Theslef和Carin Sahlberg

4 33

维甲酸在体内外对小鼠的治疗:骨骼染色Gillian M.Morriss Kay

5 41

移植后小鼠胚胎的细胞移植和标记Gabriel A.Quinlan、Paul A.Trainor和Patrick P.L.Tam

6 61

将克隆DNA显微注射到受精的单细胞小鼠体内生产转基因啮齿动物

鸡蛋

San Ling Si Hoe和David Murphy

7 101

Cre重组酶通过胚胎干细胞安娜·卡特琳娜·哈贾托尼、梅琳达·皮里和安德拉斯·纳吉介导的小鼠基因组改变

8 123

小鼠胚胎干细胞中的基因捕获Jane Brennan和William C.Skarnes

9 139

H-2KbtsA58转基因小鼠Noble条件不朽细胞系的产生和生长

10 159

转基因小鼠胚胎转录调控研究的报告基因JonathanD.Gilthorpe和PeterW.J.Rigby

11 183

lacZ转基因小鼠在细胞谱系研究中的应用

Paul A.Trainor、Sheila X.Zhou、Maala Parameswaran、Gabriel A.Quinlan、Monica Gordon、Karin Sturm和Patrick P.L.Tam

小鼠原始生殖细胞的分离与体外培养

第二部分。鸡胚213

13 215

鸟类胚胎:Ivor Mason概述

14 221

鸡胚:孵化和分离Ivor Mason

15 225

新文化阿马塔霍恩布鲁赫

16 245

移植亨森结克劳迪奥·D·斯特恩

17 255

体节移植Claudio D.Stern

18 265

脊索移植物

安德鲁·卢姆登和苏珊·迪特里希

19 273

鸟类神经组织Sarah Guthrie的移植

20 281根尖嵴和极化区移植Cheryl Tickle

21 293

Marysia Placzek和Kim Dale胶原蛋白凝胶中的组织重组

22 305

鹌鹑雏鸡嵌合体

玛丽·艾美·泰利特、凯瑟琳·齐勒和妮可·M·勒杜林

23 319

使用荧光染料对雏鸡进行命运定位、谱系分析和轴突追踪

乔纳森·D·W·克拉克

第三部分两栖动物胚胎329

24 331

非洲爪蟾发展概况

25 341

中胚层诱导试验C.Michael Jones和James C.Smith

26 351

两栖动物神经诱导分析的实验胚胎学方法

Ray Keller、Ann Poznanski和Tamira Elul

27 393

一种产生转基因青蛙胚胎的方法Enrique Amaya和Kristen L.Kroll

Axolotl/newt Malcolm Maden art IV.斑马鱼429

29 431

斑马鱼:早期发展概述奈杰尔·霍尔德和齐凌旭

30 441斑马鱼发育突变的小规模标记筛选

Peter D.Currie、Thomas F.Schilling和Philip W.Ingham

31461转基因斑马鱼

特雷弗·乔维特

32 487向受精斑马鱼卵中微量注射DNA、RNA和蛋白质以分析基因

作用

奈杰尔·霍尔德和齐凌旭

33 491非哺乳动物胚胎中的维甲酸

马尔科姆·马登

第五部分非椎骨脊索动物511

34513原脊索动物

Peter W.H.Holland和Hiroshi Wada

第六部分逆转录病毒517

35519逆转录病毒载体向啮齿动物胚胎的基因转移

Grace K.Pavlath和Marla B.Luskin

利用具有复制能力的逆转录病毒在鸟类胚胎中进行36 539基因转移

Cairine Logan和Philippa Francis West

第七部分。分子技术553

37555消减杂交与cDNA文库的构建

Bruce Blumberg和Juan Carlos Izpisúa Belmonte

38 575真核细胞mRNA的差异显示

Antonio Tugores和Juan Carlos Izpísua Belmonte

39 591用退化寡核苷酸引物对胚胎进行RT-PCR

安东尼·格雷厄姆

40 601单细胞RT-PCR cDNA减影

达米安·L·韦弗、塞萨尔·努涅斯、克莱尔·布鲁内、维多利亚·博斯托克和杰拉德·布拉德

41 611放射性核糖探针与组织切片RNA的原位杂交

Radma Mahmood和Ivor Mason

Huma Shamim、Radma Mahmood和Ivor Mason全胚胎RNA原位杂交

非洲爪蟾胚胎的全山原位杂交

44 641

文昌鱼胚胎的全套原位杂交

45 645

切片原位杂交(非放射性)Maria Rex和Paul J.Scotting

46 655

聚酯蜡免疫组织化学Andrew Kent

47 663

全胚胎免疫组织化学观察

48 667

程序性细胞死亡的全胚胎分析安东尼·格雷厄姆

49 673

反义寡核苷酸对整个鸡胚的基因干扰:最佳环瓶培养技术JonathanCooke和AlisonIsaac

50 699

蛋白质技术:免疫沉淀、体外激酶测定和Western Blotting David I.Jackson和Clive Dickson

第八部分。显微镜和摄影709

51 711

显微镜和显微摄影技术

理查德·J·T·温盖特

指数

贡献者

Enrique Amaya•Wellcome,英国剑桥CRC研究所

Juan Carlos Izpísua Belmonte•基因表达实验室,加州拉荷亚索尔克生物科学研究所

Bruce Blumberg•加利福尼亚州拉荷亚索尔克生物科学研究所基因表达实验室

维多利亚·博斯托克•英国曼彻斯特大学生物科学学院

Gerard Brady•英国曼彻斯特大学生物科学学院

简·布伦南•英国苏格兰爱丁堡大学BBSRC基因组研究中心

克莱尔·布鲁内特•英国曼彻斯特大学生物科学学院

Jonathan D.W.Clarke•伦敦大学学院解剖与发育生物学系

David L.Cockroft•英国牛津大学动物学系帝国癌症研究基金

乔纳森·库克•英国伦敦国家医学研究所

Peter D.Currie•英国伦敦帝国癌症研究基金分子胚胎学部

Kim Dale•发展遗传学计划,英国谢菲尔德大学克雷布斯研究所

克莱夫·迪克森•帝国癌症研究基金会,英国伦敦

Susanne Dietrich•英国伦敦国王学院盖伊校区颅面发育系Tamira Elul•加州大学伯克利分校生物物理学研究生组

Philippa Francis West•英国伦敦国王学院盖伊校区颅面发育系

Jonathan D.Gilthorpe•英国伦敦国王学院盖伊校区发育神经生物学系MRC大脑发育计划

莫妮卡·戈登(MonicaGordon)•澳大利亚温特沃思维尔儿童医学研究所胚胎学室

Anthony Graham•英国伦敦国王学院盖伊校区实验病理学系

Sarah Guthrie•英国伦敦国王学院盖伊校区发育神经生物学系MRC大脑发育计划

Anna Katerina Hadjantonakis•Samuel LunenfeldResearch Institute,Mount Sinai Hospital,Toronto,Canada

Brigid L.M.Hogan•细胞生物学系,霍华德休斯医学院,范德比尔特大学医学院,田纳西州纳什维尔

奈杰尔·霍尔德•英国伦敦大学学院解剖与发育生物学系(已故)

Peter W.H.Holland•英国白夜雷丁大学动物与微生物科学学院

Amata Hornbruch•MRC大脑发展计划,英国伦敦国王学院盖伊校区发展神经生物学系

Philip W.Ingham•英国谢菲尔德大学克雷布斯研究所发育遗传学项目Alison Isaac•英国伦敦国家医学研究所David I.Jackson•英国伦敦帝国癌症研究基金会C.Michael Jones•英国伦敦切斯特Beatty实验室

Trevor Jowett•英国泰恩河畔纽卡斯尔大学泰恩河畔纽卡斯尔医学院生物化学和遗传学系

Ray Keller•弗吉尼亚州夏洛茨维尔弗吉尼亚大学生物系

安德鲁·肯特•英国伦敦国王学院盖伊校区解剖学、细胞和人类生物学系克里斯汀·L·克罗尔•威康,英国剑桥CRC研究所

Patricia A.Labosky•细胞生物学系,霍华德休斯医学院,范德比尔特大学医学院,田纳西州纳什维尔

Nicole M.Le Douarin•Centre National de la Recherche Scientifique,Institute d'Embertologie Cellulaire et Moleculaire,College de France,Nogent sur Marne,France

Cairine Logan•加拿大卡尔加里大学解剖与细胞生物学系神经科学研究小组

Andrew Lumsden•英国伦敦国王学院盖伊校区发育神经生物学系MRC大脑发育计划

Marla B.Luskin•佐治亚州亚特兰大埃默里大学医学院解剖与细胞生物学系

Malcolm Maden•英国伦敦国王学院发育生物学研究中心

Radma Mahmood•MRC大脑发展计划,英国伦敦国王学院盖伊校区发展神经生物学系

Paul Martin•英国伦敦大学学院解剖与发育生物学系

Ivor Mason•MRC大脑发展计划,英国伦敦国王学院盖伊校区发展神经生物学系

Gillian M.Morriss Kay•英国牛津大学人体解剖学系David Murphy•英国布里斯托尔大学医学系

加拿大多伦多西奈山医院András Nagy•Samuel Lunenfeld研究所

Mark Noble•Huntsman癌症研究所,犹他大学健康科学中心,犹他州盐湖城

César Núñez•英国曼彻斯特大学生物科学学院

澳大利亚温特沃特维尔儿童医学研究所Maala Parameswaran•胚胎学室

Grace K.Pavlath•佐治亚州亚特兰大埃默里大学医学院解剖与细胞生物学系

Melinda Pirity•Samuel Lunenfeld研究所,加拿大多伦多西奈山医院

Marysia Placzek•发展遗传学计划,英国谢菲尔德大学克雷布斯研究所

安·波兹南斯基•弗吉尼亚大学生物系,弗吉尼亚州夏洛茨维尔

Gabriel A.Quinlan•澳大利亚温特沃思维尔儿童医学研究所胚胎学室

Maria Rex•英国诺丁汉大学遗传学系

Peter W.J.Rigby•Chester Beatty Laboratories,英国伦敦

Carin Sahlberg•芬兰赫尔辛基大学生物中心

Thomas F.Schilling•英国伦敦大学学院解剖学和发育生物学系Paul J.Scotting•英国诺丁汉大学遗传学系

英国伦敦国王学院盖伊校区发育神经生物学系Huma Shamim•MRC大脑发育计划

Paul T.Sharpe•英国伦敦国王学院盖伊校区颅面发育系San Ling Si Hoe•英国布里斯托尔大学医学系

William C.Skarnes•英国苏格兰爱丁堡大学BBSRC基因组研究中心

James C.Smith•英国伦敦国家医学研究所发育生物学实验室

Claudio D.Stern•纽约哥伦比亚大学内科医师和外科医生学院遗传与发育系

卡林·斯特姆(Karin Sturm)•澳大利亚温特沃特维尔儿童医学研究所胚胎学室Patrick P.L.Tam•澳大利亚温特沃特维尔儿童医学研究所胚胎学室

玛丽·艾梅·泰勒(Marie Aimee Teillet)•法国马恩河畔诺根法国学院赛璐珞胚胎与分子研究所国家科学研究中心

芬兰赫尔辛基大学Irma Thesleff•Biocentre

谢丽尔·蒂克尔•英国邓迪大学威康信托大楼

Paul A.Trainor•英国伦敦国家医学研究所

安东尼奥·图戈雷斯(Antonio Tugores)•加利福尼亚州拉霍拉索尔克生物科学研究所基因表达实验室(Hiroshi Wada)•英国雷丁大学动物与微生物科学学院(Damian L.Weaver)•英国曼彻斯特大学生物科学学院(University of Manchester)

Richard J.T.Wingate•英国伦敦国王学院盖伊校区发育神经生物学系MRC大脑发育计划

徐启玲•英国伦敦国家医学研究所

Sheila X.Zhou•澳大利亚温特沃思维尔儿童医学研究所胚胎学室

凯瑟琳·齐勒(Catherine Ziller)•法国马恩河畔诺根法兰西学院赛璐珞胚胎与分子研究所国家科学研究中心

继续阅读此处:小鼠移植后胚胎的培养

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